1. Класіфікацыя
Гель-электрафарэз падзяляецца на вертыкальны тып (уключаючы калонныя гелі і плоскія гелі) і гарызантальныя тыпы (у асноўным плоскія гелі) (малюнак 6-18). Як правіла, вертыкальнае аддзяленне крыху пераўзыходзіць гарызантальнае, але гарызантальная падрыхтоўка геля мае па меншай меры чатыры перавагі: ёсць апора пад усім гелем, што дазваляе выкарыстоўваць агарозу з нізкай канцэнтрацыяй; можна прыгатаваць пласціны з агарозным гелем розных характарыстык; падрыхтоўка геля і загрузка ўзору больш зручныя; камера для электрафарэзу простая ў канструкцыі і эканамічная. Паколькі гарызантальны электрафарэз праводзіцца з пласцінай агарознага геля, цалкам пагружанай прыкладна на 1 мм ніжэй паверхні буфера для электрафарэзу, яго таксама называюць пагружаным электрафарэзам.
Рэзервуар для электрафарэзу DYCP-31DN для электрафарэзу ў агарозным гелі
2. Буферная сістэма
У падзеле нуклеінавых кіслот большасць сістэм прымаюць бесперапынныя сістэмы. Звычайна выкарыстоўваныя буферы для электрафарэзу ўключаюць TBE (0,08моль/л Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/л борнай кіслаты, 0,0024mol/л EDTA) буфер і THE (0,04mol/л Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/л) ацэтат натрыю, 0,0018моль/л ЭДТА) буфер. Гэтыя буферы звычайна рыхтуюцца ў выглядзе 10-кратнага зыходнага раствора і разводзяць да неабходнай канцэнтрацыі пры выкарыстанні. Хуткасць міграцыі лінейнай і кальцавой ДНК у агарозным гелі вар'іруецца ў залежнасці ад выкарыстоўванага буфера. У буферы THE хуткасць міграцыі лінейнай ДНК большая, чым у кальцавой ДНК, у той час як у буферы TBE усё наадварот.
3. Падрыхтоўка агарозного геля
(1) Падрыхтоўка гарызантальнага агарознага геля
(a) Прыгатуйце неабходную канцэнтрацыю агарознага геля, выкарыстоўваючы 1x буфер для электрафарэзу.
(b) Нагрэйце агарозу да поўнага растварэння на кіпячай вадзяной лазні, на магнітнай мешалцы або ў мікрахвалевай печы. Астудзіце раствор агарозы да 55 ° C і дадайце фарбавальнік брамісты этидий (EB) да канчатковай канцэнтрацыі 0,5 мкг/мл.
(c) Зачыніце краю шкляных або акрылавых пласцін невялікай колькасцю геля агарозы, дадайце расчоскі і размесціце зубцы расчоскі прыкладна на 0,5~1,0 мм над пласцінай.
(d) Пастаянна ўлівайце расплаўлены раствор геля агарозы ў шкляную або акрылавую форму (таўшчыня залежыць ад аб'ёму ўзору ДНК), пазбягаючы ўвядзення бурбалак паветра. Дайце яму застыць натуральным шляхам пры пакаёвай тэмпературы.
(e) Акуратна выдаліце расчоскі пасля поўнага застывання. Дадайце адпаведную колькасць буфера для электрафарэзу ў ёмістасць з гелем, пераканаўшыся, што гелевая пласціна пагружана прыкладна на 1 мм ніжэй паверхні буфера для электрафарэзу.
(2) Падрыхтоўка вертыкальнага агарознага геля
(a) Выдаліце тлушч або рэшткі са шкляных пласцін шляхам прамывання этанолам.
(b) Змесціце распорныя пласціны паміж пярэдняй і задняй плацінамі, сумясціце краю распорных пласцін з пярэдняй і задняй плацінамі і замацуеце іх заціскамі.
(c) Дадайце 2% агарозы ў 1x буфер паміж краямі распорных пласцін, каб утварыць агарозную пробку вышынёй 1 см на дне камеры для адліўкі геля.
(d) Уліце расплаўлены гель агарозы патрэбнай канцэнтрацыі, прыгатаваны ў 1x буферы, у гелевую камеру на 1 см ніжэй верху.
(e) Устаўце расчоскі, пазбягаючы захопу бурбалак паветра пад зубцамі расчоскі. Часам падчас астуджэння агарозным гелем на зубцах расчоскі могуць з'явіцца маршчыны; у такіх выпадках проста дадайце трохі расплаўленай агарозы зверху, каб зацвярдзець.
(f) Зніміце расчоскі. Каб прадухіліць уцечку буфера ў загрузным слоце, ушчыльніце злучэнне паміж пласцінай з агарозным гелем і камерай для электрафарэзу 2% агарозы і дадайце неабходную колькасць буфера.
(g) Дадайце 1x буфер для электрафарэзу ў гелевую камеру.
(h) Асцярожна загрузіце ўзоры ДНК на агарозны гель пад буферам.
Больш падрабязнай інфармацыяй пра асноўныя веды аб электрафарэзе ў агарозным гелі мы падзелімся на наступным тыдні. Жадаю, каб гэтая інфармацыя была карыснай для вашага эксперыменту.
Кампанія Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) больш за 50 гадоў спецыялізуецца на вытворчасці прыбораў для электрафарэзу з нашай уласнай прафесійнай тэхнічнай групай і цэнтрам даследаванняў і распрацовак. У нас ёсць надзейная і поўная вытворчая лінія ад праектавання да праверкі, склад, а таксама маркетынгавая падтрымка. Нашай асноўнай прадукцыяй з'яўляюцца ячэйка для электрафарэзу (рэзервуар/камера), крыніца харчавання для электрафарэзу, трансілюмінатар сіняга святлодыёда, УФ-трансілюмінатар, гелевая сістэма выявы і аналізу і г.д.
Зараз мы шукаем партнёраў, вітаем як бакі для электрафарэзу OEM, так і дыстрыб'ютараў.
Калі ў вас ёсць план пакупкі нашых прадуктаў, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас. Вы можаце адправіць нам паведамленне па электроннай пошце[электронная пошта абаронена]або[электронная пошта абаронена], або патэлефануйце нам па нумары +86 15810650221 або дадайце WhatsApp +86 15810650221 або WeChat: 15810650221.
Адсканіруйце QR-код, каб дадаць яго ў Whatsapp або WeChat.
Час публікацыі: 07 снежня 2023 г