Асноўныя метады электрафарэзу ў агарозным гелі (2)

Падрыхтоўка проб іЗагрузка

У большасці выпадкаў з-за выкарыстання бесперапыннай буфернай сістэмы без назапашвання геля ўзоры павінны мець адпаведную канцэнтрацыю і невялікі аб'ём. Выкарыстоўвайце aпіпеткапавольна дадаваць пробу, па 5-10 мкг на лунку, каб пазбегнуць значнага зніжэння дазволу. Каліўзор загрузкі, крыніца харчавання павінна быць адключана. Проба павінна ўтрымліваць фарбавальнік-індыкатар (0,025% бромфеноловый сіні або аранжавы) і цукрозу (10-15%) або гліцэрына (5-10%) для павышэння яе шчыльнасці, канцэнтрацыі пробы і прадухілення дыфузіі. Аднак часам цукроза або гліцэрына могуць выклікаць U-вобразныя палосы ў выніках электрафарэзу, чаго можна пазбегнуць, выкарыстоўваючы 2,5% раствор фиколла (полівінілпіралідон).

Электрафарэз

Напружанне для электрафарэзу складае 5-15 В/см, звычайна каля 10 В/см. Для падзелу вялікіх малекул напружанне павінна быць меншым, звычайна не перавышаючым 5 В/см.

Афарбоўка

Флуарэсцэнтны фарбавальнік брамісты этыдый (EB) звычайна выкарыстоўваецца для афарбоўвання для назірання палос ДНК у агарозным гелі. EB можа ўстаўляцца паміж парамі асноў малекул ДНК, прымушаючы EB звязвацца з ДНК. Паглынанне ультрафіялетавага святла 260 нм ДНК перадаецца EB, і звязаны EB выпраменьвае флуарэсцэнцыю пры 590 нм у чырвона-аранжавай вобласці спектру бачнага святла. Афарбоўванне геля ў растворы MgSO4 з канцэнтрацыяй 1 ммоль/л на працягу 1 гадзіны можа паменшыць фонавую флуарэсцэнцыю, выкліканую нязвязаным ЭБ, палягчаючы выяўленне невялікіх колькасцяў ДНК.

Фарбавальнік EB мае шэраг пераваг: ён просты ў выкарыстанні, не разбурае нуклеінавыя кіслоты, валодае высокай адчувальнасцю і можа афарбоўваць як ДНК, так і РНК. EB можна дадаць да ўзору і адсочваць з дапамогай УФ-паглынання ў любы час. Пасля афарбоўвання EB можна выдаліць шляхам экстракцыі н-бутанолам.

Тым не менш, фарбавальнік EB з'яўляецца моцным мутагенам, і пры працы з ім неабходна выконваць меры засцярогі, напрыклад насіць поліэтыленавыя пальчаткі. Акрыдзінавы аранжавы таксама часта выкарыстоўваецца фарбавальнік, таму што ён можа адрозніваць адна- і двухцепочечные нуклеінавыя кіслоты (ДНК, РНК). Ён дэманструе зялёную флуарэсцэнцыю (530 нм) для двухцепочечных нуклеінавых кіслот і чырвоную флуарэсцэнцыю (640 нм) для аднацепочечных нуклеінавых кіслот. Акрамя таго, для афарбоўвання можна выкарыстоўваць іншыя фарбавальнікі, такія як метыленавы сіні, метыленавы зялёны і хіналін B.

Кампанія Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) больш за 50 гадоў спецыялізуецца на вытворчасці прыбораў для электрафарэзу з нашай уласнай прафесійнай тэхнічнай групай і цэнтрам даследаванняў і распрацовак. У нас ёсць надзейная і поўная вытворчая лінія ад праектавання да праверкі, склад, а таксама маркетынгавая падтрымка. Нашай асноўнай прадукцыяй з'яўляюцца ячэйка для электрафарэзу (рэзервуар/камера), крыніца харчавання для электрафарэзу, трансілюмінатар сіняга святлодыёда, УФ-трансілюмінатар, гелевая сістэма выявы і аналізу і г.д.

Зараз мы шукаем партнёраў, вітаем як бакі для электрафарэзу OEM, так і дыстрыб'ютараў.

Калі ў вас ёсць план пакупкі нашых прадуктаў, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас. Вы можаце адправіць нам паведамленне па электроннай пошце[электронная пошта абаронена]або[электронная пошта абаронена], або патэлефануйце нам па нумары +86 15810650221 або дадайце WhatsApp +86 15810650221 або WeChat: 15810650221.

Адсканіруйце QR-код, каб дадаць яго ў Whatsapp або WeChat.