Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) - гэта адчувальны і хуткі метад, які ў асноўным выкарыстоўваецца для выяўлення пашкоджанняў і аднаўлення ДНК у асобных клетках. Назва «Каметны аналіз» паходзіць ад характэрнай формы каметы, якая з'яўляецца ў выніках: ядро клеткі ўтварае «галоўку», у той час як пашкоджаныя фрагменты ДНК мігруюць, ствараючы «хвост», падобны да каметы.
Прынцып
Прынцып Comet Assay заснаваны на міграцыі фрагментаў ДНК у электрычным полі. Непашкоджаная ДНК застаецца ў ядры клеткі, а пашкоджаная або фрагментаваная ДНК мігруе да анода, утвараючы «хвост» каметы. Даўжыня і інтэнсіўнасць хваста прама прапарцыйныя ступені пашкоджання ДНК.
Працэдура
- Падрыхтоўка клетак: Клеткі, якія падлягаюць тэсціраванню, змешваюць з агарозай з нізкай тэмпературай плаўлення і раскладваюць на прадметныя шкла для адукацыі аднастайнага пласта.
- Лізіс клетак: прадметныя шкла апускаюць у раствор для лізісу, каб выдаліць клеткавую мембрану і ядзерную мембрану, агаляючы ДНК.
- Электрафарэз: Прэзентацыі змяшчаюць у камеру для электрафарэзу ў шчолачных або нейтральных умовах. Пашкоджаныя фрагменты ДНК пад дзеяннем электрычнага поля мігруюць у бок станоўчага электрода.
- Афарбоўка: Пасля электрафарэзу прадметныя шкла афарбоўваюць флуоресцентным фарбавальнікам (напрыклад, брамістым этидием) для візуалізацыі ДНК.
- Мікраскапічны аналіз: З дапамогай флуарэсцэнтнага мікраскопа або спецыяльнага праграмнага забеспячэння аналізуюцца формы камет і вымяраюцца такія параметры, як даўжыня і інтэнсіўнасць хваста.
Выява з биорендера
Аналіз дадзеных
Вынікі Comet Assay ацэньваюцца на аснове некалькіх ключавых параметраў:
- Даўжыня хваста: Уяўляе адлегласць, на якую мігруе ДНК, паказваючы ступень пашкоджання ДНК.
- Змест ДНК хваста: Працэнт ДНК, якая мігруе ў хвост, часта выкарыстоўваецца як колькасная мера пашкоджання ДНК.
- Аліўкавы момант (OTM): Камбінуе як даўжыню хваста, так і ўтрыманне ДНК у хвасце, каб забяспечыць больш поўную меру пашкоджання ДНК.
Прыкладанні
- Даследаванні генатаксічнасці: Comet Assay шырока выкарыстоўваецца для ацэнкі ўздзеяння хімікатаў, лекаў і радыяцыі на клеткавую ДНК, што робіць яго ключавым інструментам для тэставання на генатаксічнасць.
- Экалагічная таксікалогія: Дапамагае ў аналізе ўздзеяння забруджвальных рэчываў навакольнага асяроддзя на ДНК арганізмаў, даючы зразумець бяспеку экасістэмы.
- Медыцынскія і клінічныя даследаванні: Comet Assay выкарыстоўваецца для вывучэння механізмаў аднаўлення ДНК, рака і іншых захворванняў, звязаных з ДНК. Ён таксама ацэньвае ўплыў такіх метадаў лячэння рака, як прамянёвая і хіміятэрапія, на ДНК.
- Харчаванне і сельскагаспадарчыя навукі: Выкарыстоўваецца для ацэнкі бяспекі пестыцыдаў, харчовых дабавак і іншых рэчываў, а таксама для вывучэння іх таксічных эфектаў на мадэлях жывёл.
Перавагі
- Высокая адчувальнасць: Здольны выяўляць нізкія ўзроўні пашкоджанняў ДНК.
- Простае кіраванне: Тэхніка простая, што робіць яе прыдатнай для высокапрадукцыйнага скрынінга.
- Шырокае прымяненне: Ён можа прымяняцца да розных тыпаў клетак, у тым ліку клетак жывёл і раслін.
- Колькасныя праблемы: Даючы якасныя дадзеныя аб пашкоджанні ДНК, колькасны аналіз у значнай ступені абапіраецца на праграмнае забеспячэнне і метады аналізу малюнкаў.
- Эксперыментальныя ўмовы: На вынікі могуць уплываць такія фактары, як час электрафарэзу і pH, што патрабуе ўважлівага кантролю ўмоў эксперыменту.
Абмежаванні
Comet Assay з'яўляецца неацэнным інструментам у біямедыцынскіх даследаваннях, навуцы аб навакольным асяроддзі і распрацоўцы лекаў дзякуючы сваёй гнуткасці і высокай адчувальнасці ў выяўленні пашкоджанняў і аднаўлення ДНК. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)прапануе гарызантальную камеру электрафарэзу для аналізу камет. Запрашаем звязацца з намі, каб абмеркавацьАналіз каметпратакол.
Кампанія Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) больш за 50 гадоў спецыялізуецца на вытворчасці прыбораў для электрафарэзу з нашай уласнай прафесійнай тэхнічнай групай і цэнтрам даследаванняў і распрацовак. У нас ёсць надзейная і поўная вытворчая лінія ад праектавання да праверкі, склад, а таксама маркетынгавая падтрымка. Нашай асноўнай прадукцыяй з'яўляюцца ячэйка для электрафарэзу (бак/камера), крыніца харчавання для электрафарэзу, сіні святлодыёдны трансілюмінатар, УФ-трансілюмінатар, гелевая сістэма выявы і аналізу і г. д. Мы таксама пастаўляем лабараторныя інструменты, такія як прыбор ПЦР, віхравы змяшальнік і цэнтрыфуга для лабараторыі.
Калі ў вас ёсць план пакупкі нашых прадуктаў, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас. Вы можаце адправіць нам паведамленне па электроннай пошце[электронная пошта абаронена]або[электронная пошта абаронена], або патэлефануйце нам па нумары +86 15810650221 або дадайце WhatsApp +86 15810650221 або WeChat: 15810650221.
Адсканіруйце QR-код, каб дадаць яго ў Whatsapp або WeChat.
Час публікацыі: 20 верасня 2024 г