Прынцып
Электрафарэз плёнкі з ацэтату цэлюлозы - гэта метад электрафарэзу з выкарыстаннем плёнкі з ацэтату цэлюлозы ў якасці падставы. З'ява, пры якой пад дзеяннем электрычнага поля зараджаныя часціцы рухаюцца да процілеглага электроду, называецца электрафарэз. Паколькі кожны бялок мае пэўную ізаэлектрычную кропку, калі бялок змясціць у раствор з рн ніжэй, чым яго ізаэлектрычная кропка, бялок будзе станоўча зараджаны і будзе рухацца да адмоўнага электрода. Наадварот, ён рухаецца да станоўчага полюса. Паколькі хуткасць малекул бялку, якія рухаюцца ў электрычным полі, звязана з іх зарадам, формай і памерам малекул, розныя вавёркі можна падзяліць з дапамогай электрафарэзу. Сыроватка змяшчае мноства бялкоў, усе з якіх маюць ізаэлектрычныя кропкі пры pH7,5 або менш. Калі сыроватку змяшчаюць у буфер з pH 8,6 для правядзення электрафарэзу, усе бялкі сыроваткі зараджаюцца адмоўна і будуць рухацца ў бок станоўчага электрычнага поля. Паколькі розныя вавёркі сыроваткі крыві маюць розныя зарады пры аднолькавым pH, малекулярныя часціцы адрозніваюцца па памеры, і, такім чынам, хуткасць міграцыі розная, і яны падзяляюцца з дапамогай электрафарэзу. Ізаэлектрычныя кропкі і малекулярныя масы сыроватачных бялкоў паказаны ў табліцы ніжэй:
| Бялок | Ізаэлектрычныя кропкі (PI) | Малекулярная маса |
| Альбумін | 4,88 | 69 000 |
| α1-глулін | 5.00 | 200 000 |
| α2-глулін | 5.06 | 300 000 |
| β-глулін | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-глулін | 6.85~7.50 | 156 000 ~ 300 000 |
Эксперымент заключаецца ў падзеле розных бялкоў у сыроватцы крыві з дапамогай мембраны з ацэтату цэлюлозы (скарочана CAM) у якасці апорнага асяроддзя. CAM - гэта разнавіднасць успененых губакeплёнка з добрай аднастайнасцю і таўшчынёй 0,1 мм-1,5 мм, якая мае пэўнае водапаглынанне.
Матэрыялы, прыборы і рэагенты для САМ-электрафарэзу
Узоры:здаровай сыроваткі крыві чалавека
інструмент:крыніца харчавання DYY-6C, рэзервуар для электрафарэзу DYCP-38C, найвышэйшая загрузка ўзору WD-9404
Рэагенты
1) мембрана з ацэтату цэлюлозы 7X9см
2) Буферны раствор барбітолу з рН 8,6 (іённая сіла 0,05-0,09, гэта 0,06 тыд. разу): вазьміце 1,84 г дыэтылавага барбітуравай кіслаты, затым вазьміце 1,03 г пентабарбіталу дыэтылавага натрыю, дадайце трохі дыстыляванай вады для нагрэву для растварэння і зрабіце да 1000 мл;
3) Пляма: Ponceau S 0,2 г, трихлоруксусной 3 г, дадаць 100 мл дыстыляванай вады;
4) TBS/T або PBS/T: 45 мл 95% этанолу, 5 мл ледзяной воцатнай кіслаты, дадаць 50 мл дыстыляванай вады;
5) Ачышчальны раствор: 70 мл бязводнага этанолу, 30 мл ледзяной воцатнай кіслаты.
Эксперымент Method
1) Падрыхтуйце мембрану: пагрузіце мембрану ў буферны раствор барбітолу на 30 хвілін-8 гадзін, выміце яе і выдаліце лішні раствор паглынальнай паперай.
2) Загрузка ўзораў: Адрозніце шурпаты і гладкі бок мембраны і адзначце лінію на адлегласці 1,5 см ад верхняга канца шурпатага боку. Загрузіце ўзоры шурпатым бокам пры дапамозе лепшага інструмента для загрузкі ўзораў. Заўвага: ўзоры трэба загружаць шурпатым бокам мембраны. Пасля поўнага пранікнення ўзораў сыроваткі ў мембрану перавярніце мембрану, пакладзеце шурпатай бокам (з узорамі) уніз да ёмістасці, а канец з узорамі змесціце ў адмоўны электрод.
3) Электрафарэз: Уключыце сілкаванне, 0,4～Мембрана 0,6 м А/см, час працы 30-45 мін. Пасля запуску электрафарэзу адключыце электрычнасць.
4) Пляма і ачыстка: выміце мембрану з бака і акуніцеit у раствор фарбавальніка на 5 хвілін, а затым ачысціце яго ў ачышчальным растворы зноў і зноў на працягу 3-4 разоў, пакуль колер фону не стане празрыстым. Сыроватачныя вавёркі павінны быць паказаны на палосах, і звычайна ёсць пяць зон, якія ўтвараюць верхні канец пазначанай лініі, альбумін, α1-глулін, α2-глулін, β-глулін, γ-глулін.
5) Кансервацыя: паставіць сухі электрафарэзгрупау мыйным растворы на 10-15 хвілін, а затым дастаньце і наляпіце на чыстае шкло, пасля высыхання яно стане празрыстай плёнкайгрупа.
ЭксперыментуйцеВынік
Эфект падзелу ўзораў сыроваткі добры, і няма з'явы палоснага хваста. Паўтаральнасць вынікаў адрозніваецца ў залежнасці ад працэдур выпрабаванняў і метадаў эксперыментатара, і паўтаральнасць высокая.
Заключэнне
Сістэма хуткага клінічнага выяўлення электрафарэзу (Бак для электрафарэзуDYCP-38C,крыніца харчаванняDYY-6C і вышэйшая загрузка ўзораў WD-9404), вырабленыя нашайкампанія Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdадпавядае эксперыментальным патрабаванням,івынікі прайграваныя, простыя і хуткія, прыдатныя длянавучаннедаследаванні.
Пекін ЛюіBiotechnology Co., Ltd спецыялізуецца на вытворчасці прадуктаў для электрафарэзу для біялагічных навук, якіямае больш чым 50-гадовую гісторыю ў Кітаі, і кампанія можа забяспечыць стабільную і якасную прадукцыю па ўсім свеце. Дзякуючы шматгадовым распрацоўкам, ён варты вашага выбару!
Зараз мы шукаем партнёраў, вітаем як бакі для электрафарэзу OEM, так і дыстрыб'ютараў.
Для атрымання дадатковай інфармацыі пра нас, калі ласка, звяжыцеся з намі па электроннай пошце[электронная пошта абаронена]або[электронная пошта абаронена].
Час публікацыі: 14 лістапада 2022 г