Прынцып эксперыменту
Электрафарэз гемаглабіну накіраваны на выяўленне і пацверджанне розных нармальных і анамальных гемаглабінаў.
З-за розных зарадаў і ізаэлектрычных кропак розных тыпаў гемаглабіну ў буферным растворы з пэўным pH, калі ізаэлектрычная кропка гемаглабіну ніжэй, чым pH буфернага раствора, гемаглабін нясе адмоўны зарад і мігруе да анода падчас электрафарэзу. І наадварот, гемаглабін з станоўчым зарадам рухаецца да катода.
Пры пэўным напружанні і пасля пэўнага часу электрафарэзу гемаглабін з рознымі зарадамі і малекулярнымі масамі дэманструюць розныя напрамкі і хуткасці міграцыі. Гэта дазваляе падзяліць асобныя зоны, і наступны каларыметрычны або электрафарэтычны сканіруючы аналіз можа быць выкананы ў гэтых зонах для колькаснага вызначэння розных гемаглабінаў. Найбольш часта выкарыстоўваным метадам з'яўляецца мембранны электрафарэз з ацэтату цэлюлозы рн 8,6.
Унутры цытаплазмы групы этыленгліколю (CHOH-CHOH), якія прысутнічаюць у глікагене або поліцукрыдах (такіх як мукапаліцукрыды, мукапратэіны, глікапратэіны, глікаліпіды і г.д.), акісляюцца перыядычнай кіслатой і ператвараюцца ў альдэгідныя групы (CHO-CHO). Гэтыя альдэгідныя групы злучаюцца з бясколерным пурпурно-чырвоным рэагентам Шыфа, утвараючы пурпурно-чырвоны фарбавальнік, які асядае там, дзе ў клетцы прысутнічаюць поліцукрыды. Гэтая рэакцыя вядомая як перыядычнае афарбоўванне кіслатой Шыфа (PAS), якое раней называлася афарбоўваннем глікагенам.
Метад эксперыменту
матэрыялы:Ацэтат цэлюлозымембран, апарат для электрафарэзу(DYCP-38C і блок харчавання DYY-6C), Палепшаны інструмент загрузкі ўзораў (піпетка), спектрафатометр, каларыметрычныя кюветы, буферы.
буфер:
(1) Буфер TEB з pH 8,6: Узважце 10,29 г трыс, 0,6 г ЭДТА, 3,2 г борнай кіслаты і дадайце дыстыляваную ваду да 1000 мл.
(2) Боратны буфер: Узважце 6,87 г буры і 5,56 г борнай кіслаты і дадайце дыстыляваную ваду да 1000 мл.
Працэдура:
Pаднаўленне раствора гемаглабіну
Бяруць 3 мл крыві, якая змяшчае гепарын або цытрат натрыю ў якасці антыкаагулянта. Цэнтрыфугуйце пры 2000 абаротаў у хвіліну на працягу 10 хвілін і выкіньце плазму. Тройчы прамыйце эрытрацыты фізіялагічным растворам (750 абаротаў у хвіліну, 5 хвілін цэнтрыфугавання кожны раз). Цэнтрыфугуйце пры 2200 абаротаў у хвіліну на працягу 10 хвілін і выкіньце супернатант. Дадайце роўную колькасць дыстыляванай вады, затым дадайце 0,5 аб'ёму четыреххлористого вугляроду. Энергічна боўтайце на працягу 5 хвілін, а затым цэнтрыфугуйце пры 2200 абаротах у хвіліну на працягу 10 хвілін, каб сабраць верхні раствор Hb для наступнага выкарыстання.
Намочванне мембраны
Разрэжце мембрану з ацэтату цэлюлозы на палоскі памерам 3 см × 8 см. Замочыце іх у буферы TEB з pH 8,6 да поўнага насычэння, затым выміце і прамакніце фільтравальнай паперай.
Плямістасць
Выкарыстоўвайце піпетку, каб нанесці вертыкальна 10 мкл раствора гемаглабіну на мембрану з ацэтату цэлюлозы (шурпаты бок), прыкладна ў 1,5 см ад краю.
Электрафарэз
Наліце боратны буферны раствор у камеру для электрафарэзу. Размесціце мембрану з ацэтату цэлюлозы плямістым бокам на канцы камеры з катодам. Працуйце пры 200 В на працягу 30 хвілін.
Элюцыя
Выражыце зоны HbA і HbA2, змесціце іх у асобныя прабіркі і дадайце 15 мл і 3 мл дыстыляванай вады адпаведна. Акуратна падтрасіце, каб гемаглабін цалкам вымыўся, затым змяшайце.
Каларыметрыя
Абнуліце паглынанне, выкарыстоўваючы дыстыляваную ваду для элююючага раствора, і вымерайце паглынанне пры 415 нм.
Разлік
HbA2(%) = абсорбцыя трубкі HbA2 / (абсорбцыя трубкі HbA × 5 + абсорбцыя трубкі HbA2) × 100%
Разлік вынікаў эксперыменту
Эталонны дыяпазон для pH 8,6 TEB Буферны электрафарэз з ацэтатам цэлюлозы: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%
Заўвагі
Час электрафарэзу не павінна быць занадта доўгім. Мембрана з ацэтату цэлюлозы не павінна перасыхаць падчас электрафарэзу. Спыніць электрафарэз, калі HbA і HbA2 будуць выразна падзеленыя. Працяглы электрафарэз можа выклікаць палосную дыфузію і размытасць.
Пазбягайце выкарыстання занадта вялікай колькасці ўзораў. Залішняя колькасць вадкага гемаглабіну можа прывесці да адслаення паласы або недастатковага афарбоўвання, што прывядзе да ілжыва павышанага ўзроўню HbA.
Прадухіленне забруджвання мембраны з ацэтату цэлюлозы вавёркамі.
Ток не павінен быць занадта вялікім; у адваротным выпадку паласы гемаглабіну могуць не аддзяліцца.
Заўсёды ўключайце ў якасці кантролю ўзоры ад нармальных людзей і неабходныя вядомыя анамальныя гемаглабіны.
Beijing Liuyi Biotechnology вырабляе прафесійны электрафарэзны бак для электрафарэзу гемаглабіну, які з'яўляецца мадэллюDYCP-38Cрэзервуар для электрафарэзу з мембранай ацэтату цэлюлозы, і ёсць дзве мадэлі крыніцы харчавання для электрафарэзу з мембранай ацэтату цэлюлозы.ДЫГ-2СіDYY-6Cкрыніца харчавання.
Між тым, Beijing Liuyi Biotechnology забяспечвае ацэтатную мембрану цэлюлозы для кліентаў, і памер ацэтатнай мембраны цэлюлозы можна наладзіць. Запрашаем запытаць у нас узоры і дадатковую інфармацыю.
Брэнд Beijing Liuyi мае больш чым 50-гадовую гісторыю ў Кітаі, і кампанія можа пастаўляць стабільную і якасную прадукцыю па ўсім свеце. Дзякуючы шматгадовым распрацоўкам, ён варты вашага выбару!
Зараз мы шукаем партнёраў, вітаем як бакі для электрафарэзу OEM, так і дыстрыб'ютараў.
Калі ў вас ёсць план пакупкі нашых прадуктаў, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас. Вы можаце адправіць нам паведамленне па электроннай пошце[электронная пошта абаронена]або[электронная пошта абаронена], або патэлефануйце нам па нумары +86 15810650221 або дадайце Whatsapp +86 15810650221 або WeChat: 15810650221
Час публікацыі: 20 верасня 2023 г