На мінулым тыдні мы падзяліліся некалькімі меркаваннямі аб выкарыстанні электрафарэзу з ацэтатнай мембранай цэлюлозы, і мы скончым гэтую тэму сёння для вашай даведкі.
Выбар Канцэнтрацыя буфера
Канцэнтрацыя буфера, якая выкарыстоўваецца пры электрафарэзе з ацэтатнай мембранай цэлюлозы, звычайна ніжэйшая, чым пры электрафарэзе з паперай. Звычайна выкарыстоўваецца pH 8,6Bарбітальны буфер звычайна выбіраецца ў дыяпазоне ад 0,05 моль/л да 0,09 моль/л. Пры выбары канцэнтрацыі праводзіцца папярэдняе вызначэнне. Напрыклад, калі даўжыня мембраннай паласы паміж электродамі ў камеры электрафарэзу складае 8-10 см, то на сантыметр даўжыні мембраны патрабуецца напружанне 25 В, а сіла току павінна складаць 0,4-0,5 мА на сантыметр шырыні мембраны. Калі гэтыя значэння не дасягаюцца або перавышаюцца падчас электрафарэзу, канцэнтрацыю буфера варта павялічыць або разбавіць.
Празмерна нізкая канцэнтрацыя буфера прывядзе да хуткага перамяшчэння палос і павелічэння шырыні палос. З іншага боку, празмерна высокая канцэнтрацыя буфера будзе запавольваць міграцыю палос, ускладняючы адрозненне пэўных палос падзелу.
Варта адзначыць, што пры мембранным электрафарэзе з ацэтату цэлюлозы значная частка току праходзіць праз узор, які вылучае значную колькасць цяпла. Часам абраная канцэнтрацыя буфера можа лічыцца адпаведнай. Аднак ва ўмовах падвышанай тэмпературы навакольнага асяроддзя або пры выкарыстанні больш высокага напружання выпарэнне вады з-за цяпла можа ўзмацніцца, што прывядзе да празмерна высокай канцэнтрацыі буфера і нават да высыхання мембраны.
Аб'ём выбаркі
Пры мембранным электрафарэзе з ацэтату цэлюлозы колькасць аб'ёму ўзору вызначаецца рознымі фактарамі, уключаючы ўмовы электрафарэзу, уласцівасці самога ўзору, метады афарбоўвання і метады выяўлення. Як правіла, чым больш адчувальны метад выяўлення, тым меншым можа быць аб'ём пробы, што з'яўляецца перавагай для падзелу. Калі аб'ём пробы празмерны, карціны электрафарэтычнага падзелу могуць быць невыразнымі, і афарбоўванне таксама можа заняць шмат часу. Аднак пры колькасным аналізе аддзеленых афарбаваных палос з выкарыстаннем метадаў каларыметрычнага выяўлення элюцыі аб'ём пробы не павінен быць занадта малым, бо гэта можа прывесці да зніжэння значэнняў паглынання для некаторых кампанентаў, што прывядзе да большых памылак пры разліку іх утрымання. У такіх выпадках аб'ём пробы павінен быць адпаведна павялічаны.
Як правіла, аб'ём пробы, які дадаецца на кожны сантыметр лініі нанясення пробы, складае ад 0,1 да 5 мкл, што эквівалентна колькасці пробы ад 5 да 1000 мкг. Напрыклад, пры звычайным электрафарэзе сыроватачна бялку аб'ём пробы, які дадаецца на кожны сантыметр лініі аплікацыі, звычайна не перавышае 1 мкл, што эквівалентна 60-80 мкг бялку. Аднак пры аналізе ліпапратэінаў або глікапратэінаў адным і тым жа метадам электрафарэзу аб'ём пробы неабходна адпаведна павялічыць.
У заключэнне варта сказаць, што найбольш прыдатны аб'ём пробы павінен быць абраны ў залежнасці ад канкрэтных умоў праз серыю папярэдніх эксперыментаў.
Выбар раствора для афарбоўвання
Аддзеленыя палосы пры электрафарэзе з мембранай ацэтату цэлюлозы звычайна афарбоўваюць перад выяўленнем. Розныя кампаненты ўзору патрабуюць розных метадаў афарбоўвання, і метады афарбоўвання, прыдатныя для электрафарэзу з ацэтатнай мембранай цэлюлозы, могуць не цалкам прымяняцца да фільтравальнай паперы.
Ёсць тры асноўных прынцыпу выбару раствора для афарбоўваннямембрана з ацэтату цэлюлозы. па-першае,Варта аддаваць перавагу водарастваральным фарбавальнікам, чым спіртараспушчальным, каб пазбегнуць усаджвання мембраны і дэфармацыі, выкліканай афарбоўваючым растворам апошняга. Пасля афарбоўвання важна прамыць мембрану вадой і мінімізаваць працягласць афарбоўвання. У адваротным выпадку мембрана можа скруціцца або зморшчыцца, што паўплывае на наступнае выяўленне.
Па-другое, для ўзору пераважна выбіраць фарбавальнікі з моцным сродством афарбоўвання. У ацэтатна-цэлюлознамембранным электрафарэзе сыроватачных бялкоў звычайна выкарыстоўваецца amino black 10B з-за яго моцнага сродства афарбоўвання да розных кампанентаў сыроватачна бялку і яго стабільнасці.
Па-трэцяе, варта выбіраць надзейныя якасныя фарбавальнікі. Некаторыя фарбавальнікі, нягледзячы на аднолькавую назву, могуць утрымліваць прымешкі, якія прыводзяць да асабліва цёмнага фону пасля афарбоўвання. Гэта можа нават размыць першапачаткова добра падзеленыя палосы, у выніку чаго іх будзе цяжка адрозніць.
Нарэшце, важны выбар канцэнтрацыі раствора для афарбоўвання. Тэарэтычна можа здацца, што больш высокая канцэнтрацыя фарбавальнага раствора прывядзе да больш стараннага афарбоўвання кампанентаў узору і лепшых вынікаў афарбоўвання. Аднак гэта не так. Сродства сувязі паміж кампанентамі пробы і фарбавальнікам мае пэўную мяжу, якая не павялічваецца з павелічэннем канцэнтрацыі афарбоўвае раствора. Наадварот, празмерна высокая канцэнтрацыя фарбавальнага раствора не толькі марнуе фарбавальнік, але і робіць цяжкім дасягненне выразнага фону. Больш за тое, калі інтэнсіўнасць колеру дасягае пэўнага максімальнага значэння, крывая паглынання фарбавальніка не адпавядае лінейнай залежнасці, асабліва ў колькасных вымярэннях. Пры электрафарэзе з ацэтатнай мембранай цэлюлозы канцэнтрацыя раствора для афарбоўвання звычайна ніжэйшая, чым пры электрафарэзе паперы.
Падрабязнасці, якія варта ведаць аб Beijing Liuyi Biotechnology's мембрана з ацэтату цэлюлозырэзервуар для электрафарэзу і яго прымяненне для электрафарэзу, калі ласка, наведайце тут:
лЭксперымент па падзелу сыроватачна бялку з дапамогай мембраны з ацэтату цэлюлозы
лЭлектрафарэз ацэтатнай мембраны цэлюлозы
Калі ў вас ёсць план пакупкі нашых прадуктаў, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас. Вы можаце адправіць нам паведамленне па электроннай пошце[электронная пошта абаронена]або[электронная пошта абаронена], або патэлефануйце нам па нумары +86 15810650221 або дадайце WhatsApp +86 15810650221 або WeChat: 15810650221.
Даведка:Электрафарэз (другое выданне) містэра Лі
Час публікацыі: 6 чэрвеня 2023 г