Што такое электрафарэз у поліакрыламідным гелі?

Электрафарэз у полиакриламидном гелі

Электрафарэз у гелі з'яўляецца фундаментальным метадам у лабараторыях біялагічных дысцыплін, які дазваляе раздзяляць макрамалекулы, такія як ДНК, РНК і вавёркі. Розныя асяроддзя і механізмы падзелу дазваляюць больш эфектыўна раздзяляць падгрупы гэтых малекул, выкарыстоўваючы іх фізічныя характарыстыкі. У прыватнасці, для бялкоў часта метадам выбару з'яўляецца электрафарэз у поліакрыламідным гелі (PAGE).

PAGE - гэта метад, які падзяляе макрамалекулы, такія як вавёркі, на аснове іх электрафарэтычнай рухомасці, гэта значыць здольнасці аналітаў рухацца да электрода з процілеглым зарадам. У PAGE гэта вызначаецца зарадам, памерам (малекулярнай масай) і формай малекулы. Аналіты рухаюцца праз пары, утвораныя ў поліакрыламідным гелі. У адрозненне ад ДНК і РНК, вавёркі адрозніваюцца па зараду ў залежнасці ад уключаных амінакіслот, якія могуць уплываць на іх працу. Струны амінакіслот могуць таксама ўтвараць другасныя структуры, якія ўплываюць на іх відавочны памер і, адпаведна, на тое, як яны могуць рухацца праз поры. Таму часам можа быць пажадана дэнатураваць вавёркі перад электрафарэзам, каб лінеарызаваць іх, калі патрабуецца больш дакладная ацэнка памеру.

СТАР. SDS

Электрафарэз у поліакрыламідным гелі з дадэцылсульфатам натрыю - гэта метад, які выкарыстоўваецца для падзелу малекул бялку масай ад 5 да 250 кДа. Вавёркі падзяляюцца выключна на аснове іх малекулярнай масы. Дадэцылсульфат натрыю, аніённае павярхоўна-актыўнае рэчыва, дадаецца пры падрыхтоўцы геляў, які маскіруе ўласныя зарады ўзораў бялку і надае ім аднолькавае стаўленне зарада да масы. Кажучы простымі словамі, ён дэнатуруе вавёркі і надае ім адмоўны зарад.

Родная СТАР

Native PAGE - гэта метад, які выкарыстоўвае недэнатураваныя гелі для падзелу бялкоў. У адрозненне ад SDS PAGE, пры падрыхтоўцы геляў не дадаецца дэнатуратар. У выніку падзел бялкоў адбываецца на аснове зарада і памеру бялкоў. У гэтай методыцы канфармацыя, згортванне і амінакіслотныя ланцужкі бялкоў з'яўляюцца фактарамі, ад якіх залежыць падзел. Вавёркі не пашкоджваюцца ў гэтым працэсе, і могуць быць адноўлены пасля завяршэння падзелу.

Як працуе электрафарэз у поліакрыламідным гелі (PAGE)?

Асноўны прынцып PAGE - аддзяленне аналітаў шляхам прапускання іх праз поры поліакрыламіднага геля з дапамогай электрычнага току. Каб дасягнуць гэтага, сумесь акрыламіду і бісакрыламіду полімерызуецца (поліакрыламід) шляхам дадання персульфата амонія (APS). Рэакцыя, якая каталізуецца тетраметилэтилендиамином (TEMED), утварае сеткаватую структуру з порамі, праз якія могуць рухацца аналіты (малюнак 2). Чым вышэй працэнт агульнага акрыламіду, які змяшчаецца ў гелі, тым меншы памер пор, такім чынам, тым меншы пратэін зможа прайсці праз яго. Суадносіны акрыламіду і бісакрыламіду таксама будуць уплываць на памер пор, але гэта часта застаецца нязменным. Меншыя памеры пор таксама зніжаюць хуткасць, з якой малыя вавёркі здольныя рухацца праз гель, паляпшаючы іх дазвол і прадухіляючы іх хуткае ўцяканне ў буфер пры падачы току.

Абсталяванне для электрафарэзу ў полиакриламидном гелі

Ячэйка для гелевага электрафарэзу (бак/камера)
Рэзервуар з гелем для электрафарэзу ў поліакрыламідным гелі (PAGE) адрозніваецца ад рэзервуара з агарозным гелем. Рэзервуар з агарозным гелем размешчаны гарызантальна, а рэзервуар PAGE - вертыкальна. У вертыкальнай ячэйцы для электрафарэзу (рэзервуар/камера) тонкі гель (звычайна 1,0 мм або 1,5 мм) наліваюць паміж дзвюма шклянымі пласцінамі і ўсталёўваюць так, каб ніжняя частка геля была пагружана ў буфер адной камеры, а верхняя - у буфер. у іншай камеры. Пры падачы току невялікая колькасць буфера мігруе праз гель з верхняй камеры ў ніжнюю. З моцнымі заціскамі, якія гарантуюць вертыкальнае становішча вузла, абсталяванне забяспечвае хуткі прагон геля з раўнамерным астуджэннем, што прыводзіць да выразных палос.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) вырабляе розныя памеры ячэек для электрафарэзу ў поліакрыламідным гелі (рэзервуары/камеры). Мадэлі DYCZ-20C і DYCZ-20G - гэта клеткі для вертыкальнага электрафарэзу (рэзервуары/камеры) для аналізу паслядоўнасці ДНК. Некаторыя ячэйкі для вертыкальнага электрафарэзу (рэзервуары/камеры) сумяшчальныя з сістэмай блоттинга, напрыклад, мадэлі DYCZ-24DN, DYCZ-25D і DYCZ-25E сумяшчальныя з сістэмай Western Blotting мадэлі DYCZ-40D, DYCZ-40G і DYCZ-40F, якія выкарыстоўваюцца для пераносу малекулы бялку з геля на мембрану. Пасля электрафарэзу SDS-PAGE Вестэрн-блот - гэта метад выяўлення спецыфічнага бялку ў бялковай сумесі. Вы можаце выбраць гэтыя сістэмы блоттинга ў адпаведнасці з эксперыментальнымі патрабаваннямі.

Блок харчавання для электрафарэзу
Каб забяспечыць электраэнергію для працы геля, вам спатрэбіцца крыніца харчавання для электрафарэзу. У Liuyi Biotechnology мы прапануем шэраг крыніц харчавання для электрафарэзу для ўсіх прымянення. Мадэль DYY-12 і DYY-12C з высокім стабільным напругай і токам можа задаволіць электрафарэз высокага напружання. Ён мае функцыю падстаўкі, часу, VH і пакрокавага прымянення. Яны ідэальна падыходзяць для IEF і прымянення электрафарэзу секвенирования ДНК. Для агульнага прымянення электрафарэзу бялку і ДНК у нас ёсць мадэлі DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 і г.д., якія таксама з'яўляюцца папулярнымі блокамі харчавання з клеткамі для электрафарэзу (бакамі/камерамі). Яны могуць быць выкарыстаны для электрафарэзу сярэдняга і нізкага напружання, напрыклад, для выкарыстання ў школьных лабараторыях, бальнічных лабараторыях і гэтак далей. Больш мадэляў для блокаў харчавання, калі ласка, наведайце наш сайт.

Брэнд Liuyi мае больш чым 50-гадовую гісторыю ў Кітаі, і кампанія можа пастаўляць стабільную і якасную прадукцыю па ўсім свеце. Праз гады развіцця, гэта варта вашага выбару!

Для атрымання дадатковай інфармацыі пра нас, калі ласка, звяжыцеся з намі па электроннай пошце[электронная пошта абаронена] or [электронная пошта абаронена].

Спасылкі на Што такое электрафарэз у поліакрыламідным гелі?
1. Электрафарэз у поліакрыламідным гелі, доктар філасофіі Карэн Сцюард, як гэта працуе, варыянты тэхнікі і яе прымяненне